1. Klasifikimi
Elektroforeza e xhelit ndahet në lloje vertikale (duke përfshirë xhel me kolonë dhe xhel me pllaka) dhe lloje horizontale (kryesisht xhel me pllaka) (Figura 6-18). Në përgjithësi, ndarja vertikale është pak më e lartë se horizontale, por përgatitja horizontale e xhelit ka të paktën katër përparësi: ka mbështetje poshtë të gjithë xhelit, duke lejuar përdorimin e agarozës me përqendrim të ulët; është e mundur të përgatiten pllaka xhel agarozë të specifikimeve të ndryshme; përgatitja e xhelit dhe ngarkimi i mostrës janë më të përshtatshme; dhoma e elektroforezës është e lehtë për t'u ndërtuar dhe me kosto efektive. Meqenëse elektroforeza horizontale kryhet me pllakën e xhelit të agarozës të zhytur plotësisht rreth 1 mm nën sipërfaqen e tamponit të elektroforezës, ajo quhet gjithashtu elektroforezë e zhytur.
Depozita e elektroforezës DYCP-31DN për elektroforezën e xhelit të agarozës
2.Sistemi Buffer
Në ndarjen e acidit nukleik, shumica e sistemeve miratojnë sisteme të vazhdueshme. Tamponët e elektroforezës që përdoren zakonisht përfshijnë TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L acid borik, 0,0024mol/L EDTA) dhe THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol acetat natriumi, 0.0018mol/L EDTA) tampon. Këta buferë zakonisht përgatiten si tretësirë 10x dhe hollohen në përqendrimin e kërkuar kur përdoren. Shkalla e migrimit të ADN-së lineare dhe rrethore në xhelin e agarozës ndryshon në varësi të tamponit të përdorur. Në buferin THE, shkalla e migrimit të ADN-së lineare është më e madhe se ajo e ADN-së rrethore, ndërsa në tampon TBE, e kundërta është e vërtetë.
3.Përgatitja e Xhelit Agarose
(1) Përgatitja e Xhelit Horizontal Agarose
(a) Përgatitni përqendrimin e kërkuar të xhelit të agarozës duke përdorur 1 x tampon elektroforezë.
(b) Ngrohni agarozën deri në tretje të plotë ose në një banjë me ujë të vluar, në një përzierës magnetik ose në një mikrovalë. Ftohni tretësirën e agarozës në 55°C dhe shtoni ngjyrën me brom etidium (EB) në një përqendrim përfundimtar prej 0,5 μg/ml.
(c) Mbyllni skajet e pllakave prej qelqi ose akrilike me një sasi të vogël xheli agaroze, shtoni një krehër dhe vendosni dhëmbët e krehës rreth 0,5-1,0 mm mbi pllakën.
(d) Derdhni tretësirën e shkrirë të xhelit të agarozës vazhdimisht në kallëpin e qelqit ose të pllakës akrilike (trashësia varet nga vëllimi i kampionit të ADN-së), duke shmangur futjen e flluskave të ajrit. Lëreni të ngurtësohet natyrshëm në temperaturën e dhomës.
(e) Hiqeni me kujdes krehërin pas ngurtësimit të plotë. Shtoni një sasi të përshtatshme të tamponit të elektroforezës në rezervuarin e xhelit, duke siguruar që pllaka e xhelit të jetë zhytur rreth 1 mm nën sipërfaqen e tamponit të elektroforezës.
(2) Përgatitja e Xhel Agarozë Vertikale
(a) Hiqni yndyrën ose mbetjet nga pllakat e qelqit duke u larë me etanol.
(b) Vendosni pllaka ndarëse midis digave të përparme dhe të pasme, rreshtoni skajet e pllakave ndarëse me digat e përparme dhe të pasme dhe fiksoni ato me kapëse.
(c) Shtoni 2% agarozë në tampon 1x midis skajeve të pllakave ndarëse për të formuar një prizë agaroze 1 cm të lartë në fund të dhomës së derdhjes së xhelit.
(d) Derdhni xhelin e shkrirë të agarozës në përqendrimin e dëshiruar, të përgatitur në 1x bufer, në dhomën e xhelit deri në 1 cm poshtë sipërme.
(e) Fusni krehërin, duke shmangur bllokimin e flluskave të ajrit nën dhëmbët e krehës. Ndonjëherë, rrudhat mund të shfaqen në dhëmbët e krehës gjatë ftohjes së xhelit të agarozës; në raste të tilla, thjesht shtoni pak agarozë të shkrirë sipër për ta ngurtësuar.
(f) Hiqni krehërin. Për të parandaluar rrjedhjen e tamponit në folenë e ngarkimit, mbyllni lidhjen midis pllakës së xhelit të agarozës dhe dhomës së elektroforezës me agarozë 2% dhe shtoni sasinë e kërkuar të tamponit.
(g) Shtoni 1 x tampon elektroforezë në dhomën e xhelit.
(h) Ngarkoni me kujdes mostrat e ADN-së në xhelin e agarozës nën tampon.
Më shumë informacion rreth njohurive bazë rreth elektroforezës së xhelit të agarozës, do të ndajmë javën e ardhshme. Uroj që këto informacione të jenë të dobishme për eksperimentin tuaj.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Bioteknology) është specializuar në prodhimin e instrumenteve të elektroforezës për më shumë se 50 vjet me ekipin tonë profesional teknik dhe qendrën e R&D. Ne kemi linjë prodhimi të besueshme dhe të plotë nga projektimi në inspektim, dhe magazinë, si dhe mbështetje për marketing. Produktet tona kryesore janë qeliza e elektroforezës (rezervuar/dhomë), furnizimi me energji elektrike me elektroforezë, transilluminator blu LED, transilluminator UV, sistemi i imazhit dhe analizës së xhelit etj.
Tani po kërkojmë partnerë, si rezervuari i elektroforezës OEM ashtu edhe shpërndarësit janë të mirëpritur.
Nëse keni ndonjë plan blerjeje për produktet tona, ju lutemi mos hezitoni të na kontaktoni. Mund të na dërgoni mesazh në email[email i mbrojtur]ose[email i mbrojtur], ose ju lutemi na telefononi në +86 15810650221 ose shtoni Whatsapp +86 15810650221, ose Wechat: 15810650221.
Ju lutemi skanoni kodin QR për ta shtuar në Whatsapp ose WeChat.
Koha e postimit: Dhjetor-07-2023