Eksperimenti i elektroforezës së hemoglobinës

Parimi i eksperimentit

Elektroforeza e hemoglobinës synon të zbulojë dhe konfirmojë hemoglobina të ndryshme normale dhe jonormale.

Për shkak të ngarkesave të ndryshme dhe pikave izoelektrike të llojeve të ndryshme të hemoglobinës, në një tretësirë ​​të caktuar tampon pH, kur pika izoelektrike e hemoglobinës është më e ulët se pH e tretësirës tampon, hemoglobina mbart një ngarkesë negative dhe migron drejt anodës gjatë elektroforezës. Në të kundërt, hemoglobina me një ngarkesë pozitive lëviz drejt katodës.

Nën një tension të caktuar dhe pas një kohe specifike të elektroforezës, hemoglobinat me ngarkesa dhe pesha të ndryshme molekulare shfaqin drejtime dhe shpejtësi të ndryshme migrimi. Kjo lejon ndarjen e zonave të dallueshme dhe analiza e mëvonshme e skanimit kolorimetrik ose elektroforetik mund të kryhet në këto zona për të përcaktuar sasinë e hemoglobinave të ndryshme. Metoda më e përdorur është elektroforeza e membranës së acetatit të celulozës me pH 8.6.

Brenda citoplazmës, grupet e etilenglikolit (CHOH-CHOH) të pranishme në glikogjen ose substanca polisakaride (si mukopolisakaridet, mukoproteinat, glikoproteinat, glikolipidet, etj.) oksidohen nga acidi periodik dhe shndërrohen në grupe aldehide (CHO-CHO). Këto grupe aldehide kombinohen me reagentin Shiff pa ngjyrë vjollcë-kuqe, duke formuar një ngjyrë vjollcë-të kuqe që depozitohet aty ku polisaharidet janë të pranishëm në qelizë. Ky reagim njihet si ngjyrosje periodike acid-Schiff (PAS), e quajtur më parë si ngjyrosje glikogjeni.

Metoda e eksperimentit

Materialet:Acetati i celulozësmembranë, aparat elektroforezë(DYCP-38C dhe furnizimi me energji DYY-6C), Mjeti i ngarkimit të mostrës superiore(pipetë), spektrofotometër, kuveta kolorimetrike, tamponat.

Tampon:

(1) pH 8,6 TEB Bufer: Peshoni 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g acid borik dhe shtoni ujë të distiluar në 1000 ml.

(2) Tampon borat: Peshoni 6,87 g boraks dhe 5,56 g acid borik dhe shtoni ujë të distiluar në 1000 ml.

Procedura:

Priparimi i tretësirës së hemoglobinës

Merrni 3 ml gjak që përmban heparin ose citrate natriumi si një antikoagulant. Centrifugoni në 2000 rpm për 10 minuta dhe hidhni plazmën. Lani rruazat e kuqe të gjakut tri herë me kripë fiziologjike (750 rpm, 5 minuta centrifugim çdo herë). Centrifugoni në 2200 rpm për 10 minuta dhe hidhni supernatantin. Shtoni një sasi të barabartë uji të distiluar, pastaj shtoni 0,5 herë vëllimin e tetraklorurit të karbonit. Tundeni fuqishëm për 5 minuta dhe më pas centrifugoni në 2200 rpm për 10 minuta për të mbledhur tretësirën e sipërme të Hb për përdorim të mëvonshëm.

Njomja e membranës

Prisni membranën e acetatit të celulozës në shirita me përmasa 3 cm × 8 cm. Zhytini ato në pH 8,6 TEB derisa të ngopen plotësisht, pastaj hiqini dhe thajini me letër filtri.

Njohuri

Përdorni një pipetë për të pikasur 10 μl të tretësirës së hemoglobinës vertikalisht në membranën e acetatit të celulozës (ana e ashpër), rreth 1,5 cm nga buza.

Elektroforeza

Hidheni tretësirën tampon borat në dhomën e elektroforezës. Vendoseni membranën e acetatit të celulozës me anën e njollosur në fundin e katodës të dhomës. Vraponi në 200 V për 30 minuta.

Elucioni

Pritini zonat HbA dhe HbA2, vendosini në provëza të veçanta dhe shtoni përkatësisht 15 ml dhe 3 ml ujë të distiluar. Shkundni butësisht për të elutuar plotësisht hemoglobinën, më pas përzieni.

Kolorimetria

Zero përthithjen duke përdorur ujë të distiluar për tretësirën e elucionit dhe matet përthithja në 415 nm.

Llogaritja

HbA2(%) = Absorbimi i tubit HbA2 / (Absorbimi i tubit HbA × 5 + Absorbimi i tubit HbA2) × 100%

Llogaritja e rezultateve eksperimentale

Gama e referencës për pH 8,6 TEB Elektroforeza e tamponit të acetatit të celulozës: HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%

Shënime

Koha e elektroforezës nuk duhet të jetë shumë e gjatë. Membrana e acetatit të celulozës nuk duhet të thahet gjatë elektroforezës. Ndaloni elektroforezën kur HbA dhe HbA2 janë të ndara qartë. Elektroforeza e zgjatur mund të shkaktojë difuzion dhe turbullim të brezit.

Shmangni përdorimin e shumë mostrave. Lëngu i tepruar i hemoglobinës mund të çojë në shkëputje të brezit ose njollë të pamjaftueshme, duke rezultuar në nivele të ngritura të rreme të HbA.

Parandaloni kontaminimin e membranës së acetatit të celulozës me proteina.

Rryma nuk duhet të jetë shumë e lartë; përndryshe, brezat e hemoglobinës mund të mos ndahen.

Gjithmonë përfshini ekzemplarë nga individë normalë dhe hemoglobina jonormale të nevojshme të njohura si kontrolle.

Beijing Liuyi Biotechnology prodhon rezervuarin profesional të elektroforezës për elektroforezën e hemoglobinës që është modeliDYCP-38CDepozita e elektroforezës së membranës së acetatit të celulozës dhe ka dy modele të furnizimit me energji elektrike të elektroforezës në dispozicion për rezervuarin e elektroforezës së membranës acetate celulozëDYY-2CdheDYY-6Cfurnizimi me energji elektrike.

Ndërkohë, Bioteknologjia e Pekinit Liuyi siguron membranën e acetatit të celulozës për klientët, dhe madhësia e membranës së acetatit të celulozës mund të personalizohet. Mirë se vini të na kërkoni mostra dhe më shumë informacion.

Marka Beijing Liuyi ka histori më shumë se 50-vjeçare në Kinë dhe kompania mund të ofrojë produkte të qëndrueshme dhe me cilësi të lartë në të gjithë botën. Përgjatë viteve të zhvillimit, ajo është e denjë për zgjedhjen tuaj!

Tani po kërkojmë partnerë, si rezervuari i elektroforezës OEM ashtu edhe shpërndarësit janë të mirëpritur.

Nëse keni ndonjë plan blerjeje për produktet tona, ju lutemi mos hezitoni të na kontaktoni. Mund të na dërgoni mesazh në email[email i mbrojtur]ose[email i mbrojtur], ose ju lutemi na telefononi në +86 15810650221 ose shtoni Whatsapp +86 15810650221, ose Wechat: 15810650221