Çfarë është elektroforeza me xhel poliakrilamid?

Elektroforeza me xhel poliakrilamid

Elektroforeza me xhel është një teknikë themelore në laboratorë në të gjithë disiplinat biologjike, që lejon ndarjen e makromolekulave si ADN, ARN dhe proteina. Mjetet dhe mekanizmat e ndryshëm të ndarjes lejojnë që nëngrupet e këtyre molekulave të ndahen në mënyrë më efektive duke shfrytëzuar karakteristikat e tyre fizike. Për proteinat në veçanti, elektroforeza me xhel poliakrilamid (PAGE) është shpesh teknika e zgjedhur.

PAGE është një teknikë që ndan makromolekulat siç janë proteinat bazuar në lëvizshmërinë e tyre elektroforetike, domethënë aftësinë e analiteve për të lëvizur drejt një elektrode me ngarkesë të kundërt. Në PAGE, kjo përcaktohet nga ngarkesa, madhësia (pesha molekulare) dhe forma e molekulës. Analitet lëvizin nëpër poret e formuara në xhel poliakrilamid. Ndryshe nga ADN-ja dhe ARN-ja, proteinat ndryshojnë në ngarkim sipas aminoacideve të inkorporuara, të cilat mund të ndikojnë në funksionimin e tyre. Vargjet e aminoacideve mund të formojnë gjithashtu struktura dytësore që ndikojnë në madhësinë e tyre të dukshme dhe rrjedhimisht mënyrën se si ato janë në gjendje të lëvizin nëpër pore. Prandaj ndonjëherë mund të jetë e dëshirueshme që proteinat të denatyrohen përpara elektroforezës për t'i linearizuar ato nëse kërkohet një vlerësim më i saktë i madhësisë.

FAQJA SDS

Elektroforeza me xhel poliakrilamid sodium-dodecil sulfat është një teknikë që përdoret për të ndarë molekulat e proteinave me masa nga 5 deri në 250 kDa. Proteinat ndahen vetëm në bazë të peshës së tyre molekulare. Dodecil sulfati i natriumit, një surfaktant anionik, shtohet në përgatitjen e xhelit që maskon ngarkesat e brendshme të mostrave të proteinave dhe u jep atyre një raport të ngjashëm ngarkese ndaj masës. Me fjalë të thjeshta, ai denatyron proteinat dhe u jep atyre një ngarkesë negative.

FAQJA amtare

Native PAGE është një teknikë që përdor xhel jo të denatyruar për ndarjen e proteinave. Ndryshe nga SDS PAGE, në përgatitjen e xhelit nuk shtohet asnjë agjent denatyrues. Si rezultat, ndarja e proteinave bëhet në bazë të ngarkesës dhe madhësisë së proteinave. Në këtë teknikë, konformimi, palosja dhe zinxhirët aminoacide të proteinave janë faktorët nga të cilët varet ndarja. Proteinat nuk dëmtohen në këtë proces dhe mund të rikuperohen pas përfundimit të ndarjes.

Si funksionon elektroforeza me xhel poliakrilamid (PAGE)?

Parimi bazë i PAGE është ndarja e analiteve duke i kaluar ato nëpër poret e një xheli poliakrilamid duke përdorur një rrymë elektrike. Për të arritur këtë, një përzierje akrilamide-bisakrilamide polimerizohet (polyakrilamid) me shtimin e persulfatit të amonit (APS). Reaksioni, i cili katalizohet nga tetrametiletilendiamina (TEMED), formon një strukturë të ngjashme me poret nëpër të cilat analitet mund të lëvizin (Figura 2). Sa më e lartë të jetë përqindja e akrilamidit total të përfshirë në xhel, aq më e vogël është madhësia e poreve, pra aq më të vogla janë proteinat që do të jenë në gjendje të kalojnë. Raporti i akrilamidit me bisakrilamidin do të ndikojë gjithashtu në madhësinë e poreve, por kjo shpesh mbahet konstante. Përmasat më të vogla të poreve gjithashtu zvogëlojnë shpejtësinë me të cilën proteinat e vogla janë në gjendje të lëvizin nëpër xhel, duke përmirësuar rezolucionin e tyre dhe duke i penguar ato të derdhen me shpejtësi në tampon kur aplikohet rryma.

Pajisje për elektroforezë me xhel poliakrilamid

Qelizë e elektroforezës me xhel (depozitë/dhoma)
Rezervuari i xhelit për elektroforezën e xhelit të poliakrilamidit (PAGE) është i ndryshëm nga rezervuari i xhelit të agarozës. Depozita e xhelit të agarozës është horizontale, ndërsa rezervuari PAGE është vertikal. Nga qeliza vertikale e elektroforezës (rezervuar/dhomë), një xhel i hollë (normalisht 1.0 mm ose 1.5 mm) derdhet midis dy pllakave qelqi dhe montohet në mënyrë që pjesa e poshtme e xhelit të zhytet në tampon në një dhomë dhe pjesa e sipërme të zhytet në tampon. në një dhomë tjetër. Kur aplikohet rryma, një sasi e vogël tampon migron përmes xhelit nga dhoma e sipërme në dhomën e poshtme. Me kapëse të forta për të garantuar që montimi të qëndrojë në një pozicion vertikal, pajisja lehtëson funksionimin e shpejtë të xhelit me ftohje të barabartë duke rezultuar në shirita të dallueshëm.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) prodhon një sërë përmasash qelizash elektroforeze me xhel poliakrilamid (tanke/dhoma). Modelet DYCZ-20C dhe DYCZ-20G janë qeliza elektroforeze vertikale (tanke/dhoma) për analizën e sekuencës së ADN-së. Disa nga qelizat e elektroforezës vertikale (tanke/dhoma) janë të pajtueshme me sistemin e blotting-it, si modeli DYCZ-24DN, DYCZ-25D dhe DYCZ-25E janë të pajtueshëm me sistemin Western Blotting model DYCZ-40D, DYCZ-40G dhe DYCZ-40F. të cilat përdoren për transferimin e molekulës së proteinës nga xheli në membranë. Pas elektroforezës SDS-PAGE, Western Blotting është një teknikë për të zbuluar një proteinë specifike në një përzierje proteinash. Ju mund t'i zgjidhni këto sisteme blotting sipas kërkesave eksperimentale.

Furnizimi me energji elektrike për elektroforezë
Për të siguruar energjinë elektrike për funksionimin e xhelit, do t'ju duhet një furnizim me energji elektrike me elektroforezë. Në Liuyi Biotechnology ne ofrojmë një sërë furnizimesh me elektroforezë për të gjitha aplikimet. Modelet DYY-12 dhe DYY-12C me tension dhe rrymë të qëndrueshme të lartë mund të plotësojnë elektroforezën e kërkesave të tensionit të lartë. Ka funksionin e qëndrimit, kohës, VH dhe aplikimit hap pas hapi. Ato janë ideale për aplikimin e elektroforezës së sekuencës IEF dhe ADN-së. Për aplikimin e elektroforezës së përgjithshme të proteinave dhe ADN-së, kemi modelin DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, e kështu me radhë, të cilat janë gjithashtu furnizime me energji elektrike të shitjes së nxehtë me qeliza elektroforeze (tanke/dhoma). Këto mund të përdoren për aplikimet e elektroforezës së tensionit të mesëm dhe të ulët, të tilla si për përdorim në laborator shkollor, laborator spitalor e kështu me radhë. Më shumë modele për furnizimin me energji elektrike, ju lutemi vizitoni faqen tonë të internetit.

Marka Liuyi ka më shumë se një histori 50-vjeçare në Kinë dhe kompania mund të ofrojë produkte të qëndrueshme dhe me cilësi të lartë në të gjithë botën. Përmes zhvillimit të viteve, ajo është e denjë për zgjedhjen tuaj!

Për më shumë informacion rreth nesh, ju lutemi na kontaktoni me email[email i mbrojtur] or [email i mbrojtur].

Referenca për Çfarë është elektroforeza me xhel poliakrilamid?
1. Karen Steward PhD elektroforezë me xhel poliakrilamid, si funksionon, variantet e teknikës dhe aplikimet e saj