Analiza e kometës (Elektroforeza me xhel me një qelizë të vetme, SCGE) është një teknikë e ndjeshme dhe e shpejtë që përdoret kryesisht për të zbuluar dëmtimin e ADN-së dhe riparimin në qeliza individuale. Emri "Comet Assay" vjen nga forma karakteristike e kometës që shfaqet në rezultate: bërthama e qelizës formon "kokën", ndërsa fragmentet e dëmtuara të ADN-së migrojnë, duke krijuar një "bisht" që i ngjan një kometë.
Parimi
Parimi i analizës së kometës bazohet në migrimin e fragmenteve të ADN-së në një fushë elektrike. ADN-ja e paprekur mbetet brenda bërthamës së qelizës, ndërsa ADN-ja e dëmtuar ose e fragmentuar migron drejt anodës, duke formuar "bishtin" e kometës. Gjatësia dhe intensiteti i bishtit janë drejtpërdrejt proporcionale me shkallën e dëmtimit të ADN-së.
Procedura
- Përgatitja e qelizave: Qelizat që do të testohen përzihen me agarozë me pikë shkrirjeje të ulët dhe shpërndahen në rrëshqitjet e mikroskopit për të formuar një shtresë uniforme.
- Liza e qelizave: Slides zhyten në një tretësirë lize për të hequr membranën qelizore dhe membranën bërthamore, duke ekspozuar ADN-në.
- Elektroforeza: Sllajdat vendosen në një dhomë elektroforeze në kushte alkaline ose neutrale. Fragmentet e dëmtuara të ADN-së migrojnë drejt elektrodës pozitive nën ndikimin e fushës elektrike.
- Ngjyrosje: Pas elektroforezës, rrëshqitjet ngjyrosen me një ngjyrë fluoreshente (p.sh., bromid etidium) për të vizualizuar ADN-në.
- Analiza mikroskopike: Duke përdorur një mikroskop fluoreshent ose softuer të specializuar, analizohen format e kometës dhe maten parametra të tillë si gjatësia dhe intensiteti i bishtit.
Imazhi nga biorender
Analiza e të dhënave
Rezultatet nga analiza e kometës vlerësohen bazuar në disa parametra kyç:
- Gjatësia e bishtit: Përfaqëson distancën në të cilën ADN migron, duke treguar shkallën e dëmtimit të ADN-së.
- Përmbajtja e ADN-së së bishtit: Përqindja e ADN-së që migron në bisht, e përdorur shpesh si masë sasiore e dëmtimit të ADN-së.
- Momenti i bishtit të ullirit (OTM): Kombinon gjatësinë e bishtit dhe përmbajtjen e ADN-së së bishtit për të siguruar një masë më të plotë të dëmtimit të ADN-së.
Aplikacionet
- Studimet e gjenotoksicitetit: Analiza e kometës përdoret gjerësisht për të vlerësuar efektet e kimikateve, ilaçeve dhe rrezatimit në ADN-në e qelizave, duke e bërë atë një mjet kyç për testimin e gjenotoksicitetit.
- Toksikologjia e Mjedisit: Ndihmon në analizimin e ndikimit të ndotësve mjedisorë në ADN-në e organizmave, duke ofruar njohuri për sigurinë e ekosistemit.
- Kërkime Mjekësore dhe Klinike: Analiza e kometës përdoret në studimin e mekanizmave të riparimit të ADN-së, kancerit dhe sëmundjeve të tjera të lidhura me ADN-në. Ai gjithashtu vlerëson ndikimin e terapive të kancerit si radioterapia dhe kimioterapia në ADN.
- Shkenca të Ushqimit dhe Bujqësisë: Përdoret për të vlerësuar sigurinë e pesticideve, aditivëve ushqimorë dhe substancave të tjera dhe për të studiuar efektet e tyre toksike në modelet e kafshëve.
Avantazhet
- Ndjeshmëri e lartë: I aftë për të zbuluar nivele të ulëta të dëmtimit të ADN-së.
- Operacion i thjeshtë: Teknika është e drejtpërdrejtë, duke e bërë atë të përshtatshme për ekzaminim me performancë të lartë.
- Aplikim i gjerë: Mund të aplikohet në lloje të ndryshme qelizash, duke përfshirë qelizat shtazore dhe bimore.
- Sfidat e kuantifikimit: Ndërsa ofron të dhëna cilësore për dëmtimin e ADN-së, analiza sasiore mbështetet shumë në softuerët dhe teknikat e analizës së imazhit.
- Kushtet Eksperimentale: Rezultatet mund të ndikohen nga faktorë si koha e elektroforezës dhe pH, që kërkojnë kontroll të kujdesshëm të kushteve eksperimentale.
Kufizimet
Analiza e kometës është një mjet i paçmuar në kërkimin biomjekësor, shkencën mjedisore dhe zhvillimin e ilaçeve për shkak të fleksibilitetit dhe ndjeshmërisë së lartë në zbulimin e dëmtimit dhe riparimin e ADN-së. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Bioteknologjia Liuyi)ofron dhomën horizontale të elektroforezës për analizën e kometës. Mirë se vini të kontaktoni me ne për të diskutuar rrethAnaliza e kometësprotokoll.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Bioteknology) është specializuar në prodhimin e instrumenteve të elektroforezës për më shumë se 50 vjet me ekipin tonë profesional teknik dhe qendrën e R&D. Ne kemi linjë prodhimi të besueshme dhe të plotë nga projektimi në inspektim, dhe magazinë, si dhe mbështetje për marketing. Produktet tona kryesore janë qeliza e elektroforezës (tank/dhoma), furnizimi me energji elektrike me elektroforezë, transilluminatori blu LED, transilluminatori UV, sistemi xhel imazhi dhe analizimi etj. Ne gjithashtu furnizojmë instrumentet laboratorike si instrument PCR, mikser vorbull dhe centrifugë për laborator.
Nëse keni ndonjë plan blerjeje për produktet tona, ju lutemi mos hezitoni të na kontaktoni. Mund të na dërgoni mesazh në email[email i mbrojtur]ose[email i mbrojtur], ose ju lutemi na telefononi në +86 15810650221 ose shtoni Whatsapp +86 15810650221, ose Wechat: 15810650221.
Ju lutemi skanoni kodin QR për ta shtuar në Whatsapp ose WeChat.
Koha e postimit: Shtator-20-2024