Elektroforeza me xhel është një nga metodat kryesore të përdorura në biologjinë molekulare për analizën e ADN-së.Kjo metodë përfshin migrimin e fragmenteve të ADN-së përmes një xhel, ku ato ndahen në bazë të madhësisë ose formës.Megjithatë, a keni hasur ndonjëherë ndonjë gabim gjatë eksperimenteve tuaja të elektroforezës, të tilla si shirita të lyer në xhelin e agarozës, ose pa shirita në xhel?Cili mund të jetë shkaku i këtyre gabimeve?
Teknikët tanë kanë përmbledhur çiftet e zgjidhjes së problemeve këtu për referencën tuaj.
1. Shirita të lyer në xhel agarozë
●ADN-ja u degradua.Shmangni kontaminimin me nukleazë.
● Buferi i elektroforezës nuk është i freskët.Pas përdorimit të përsëritur të tamponit të elektroforezës, forca jonike zvogëlohet dhe vlera e pH-së së tij rritet, kështu që kapaciteti i tamponit dobësohet, gjë që ndikon në efektin e elektroforezës.Rekomandohet që tamponi i elektroforezës të zëvendësohet shpesh.
● Janë përdorur kushte të papërshtatshme elektroforeze.Mos lejoni që tensioni të kalojë 20 V/cm dhe mbani një temperaturë <30°C gjatë elektroforezës.Për elektroforezën e vargut gjigant të ADN-së, temperatura duhet të jetë <15° C. Kontrolloni se tamponi i elektroforezës ka kapacitet të mjaftueshëm buferik.
● Shumë ADN u ngarkua në xhel.Zvogëloni sasinë e ADN-së.
● Shumë kripë në ADN.Përdorni precipitimin e etanolit për të hequr kripërat e tepërta në avancim.
● ADN-ja ishte e kontaminuar me proteina.Përdorni ekstraktimet e fenolit për të hequr proteinat në avancim.
● ADN-ja u denatyrua.Mos ngrohni para elektroforezës.Hollohet ADN-ja në tampon me 20 mM NaCl.
2. Anomalitë migrimi i brezit të ADN-së
● Rinaturimi i vendit COS të fragmentit λHind III.Ngrohni ADN-në për 5 minuta nën 65°C përpara elektroforezës dhe më pas ftohni në njësi akulli për 5 minuta.
● Janë përdorur kushte të papërshtatshme elektroforeze.Mos lejoni që tensioni të kalojë 20 V/cm dhe mbani një temperaturë <30°C gjatë elektroforezës.Kontrolloni që tamponi i elektroforezës ka kapacitet të mjaftueshëm tampon.
● ADN-ja u denatyrua.Mos ngrohni para elektroforezës.Hollohet ADN-ja në tampon me 20 mM NaCl.
3. Shirita të zbehta të ADN-së ose aspak në xhel agarozë
● Kishte sasi ose përqendrim të pamjaftueshëm të ADN-së të ngarkuar në xhel.Rritja e sasisë së ADN-së.Elektroforeza e xhelit të poliakrilamidit është pak më e ndjeshme se elektroforeza e agarozës dhe ngarkimi i mostrës mund të reduktohet në mënyrë të përshtatshme.
● ADN-ja u degradua.Shmangni kontaminimin me nukleazë.
● ADN-ja u elektroforizua nga xheli.Elektroforizoni xhelin për më pak kohë, përdorni një tension më të ulët ose përdorni një xhel me përqindje më të lartë.
● Burimi i papërshtatshëm i dritës W është përdorur për vizualizimin e ADN-së së njollosur me bromid etidium.Përdorni një dritë me gjatësi vale të shkurtër (254 nm) W për ndjeshmëri më të madhe.
4. Mungojnë brezat e ADN-së
●ADN-ja me madhësi të vogël u elektroforizua nga xhel.Elektroforizoni xhelin për më pak kohë, përdorni një tension më të ulët ose përdorni një xhel me përqindje më të lartë.
● Vështirë për të dalluar brezat e ADN-së të molekularëve të ngjashëm.Rritni kohën e elektroforezës dhe kontrolloni përqendrimine xhelit për t'u siguruar që xheli për qind duhet të përdoret saktë.
● ADN-ja u denatyrua.Mos ngrohni para elektroforezës.Hollohet ADN-ja në tampon me 20 mM NaCl.
● Fijet e ADN-së janë të mëdha dhe elektroforeza konvencionale me xhel nuk është e përshtatshme.Analiza mbi elektroforezën e xhelit të pulsit.Çfarë problemesh të tjera keni pasur me elektroforezën e xhelit të agarozës?Ne do të hulumtojmë më shumë për udhëzues në të ardhmen.
Beijing Liuyi bioteknology Co, Ltd (Liuyi Biotech) është një kompani e specializuar që fokusohet në produktet e lidhura me elektroforezën në Kinë.Historia e saj nis në vitin 1970 kur Kina nuk kishte hyrë ende në reformë dhe hapje të kohës.Përmes zhvillimit të viteve, Liuyi Bitotech ka markën e vet, e cila njihet si Marka Liuyi në tregun vendas për produktet e elektroforezës.
Marka Liuyi ka më shumë se një histori 50-vjeçare në Kinë dhe kompania mund të ofrojë produkte të qëndrueshme dhe me cilësi të lartë në të gjithë botën.Përmes zhvillimit të viteve, ajo është e denjë për zgjedhjen tuaj!
Qelizat e elektroforezës horizontale (tanke/dhoma) të Liuyi Biotech janë cilësore me pamje të mirë.Me madhësi të ndryshme të tabakave xhel, ato mund të plotësojnë kërkesat tuaja të ndryshme eksperimentale.Ne kemi ekipin tonë teknik dhe fabrikën.Nga dizajni në prodhim, lëndët e para deri te pjesët kryesore, ne mund të kontrollojmë të gjithë procesin.Seritë DYCP 31 janë për elektroforezë të ADN-së, të cilat janë modelDYCP-31 BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, dheDYCP-31E.Dallimet midis tyre janë madhësia e xhelit dhe çmimi.Ne ofrojmë përmasa të plota të produkteve për klientët tanë.ModeliDYCP-32Cmund të bëjë xhelin më të madh 250mm*250mm.
Ndërkohë, ne rekomandojmë furnizimin me energji elektrike me elektroforezëDYY-6C,DYY-6DdheDYY-10Cpër qelizat tona të elektroforezës (tanke/dhoma) seritë DYCP-31 dhe 32.
Nëse dëshironi më shumë informacion rreth produkteve, ju lutemi vizitoni këtë faqe interneti për të marrë më shumë dhe mirëpresim të na kontaktoni me email për të na njoftuar se çfarë dëshironi dhe për të parë nëse ne mund t'ju ofrojmë zgjidhjet.
Për më shumë informacion rreth nesh, ju lutemi na kontaktoni me email[email i mbrojtur], [email i mbrojtur].
Koha e postimit: Maj-09-2022