Ne ndamë disa konsiderata javën e kaluar për përdorimin e elektroforezës së membranës së acetatit të celulozës dhe do ta përfundojmë këtë temë këtu sot për referencën tuaj.
Përzgjedhja e Përqendrimi i buferit
Përqendrimi i buferit i përdorur në elektroforezën e membranës së acetatit të celulozës është përgjithësisht më i ulët se ai i përdorur në elektroforezën e letrës.PH i përdorur zakonisht është 8.6Btampon arbital zakonisht zgjidhet brenda intervalit nga 0,05 mol/L deri në 0,09 mol/L.Gjatë zgjedhjes së përqendrimit, bëhet një përcaktim paraprak.Për shembull, nëse gjatësia e shiritit të membranës midis elektrodave në dhomën e elektroforezës është 8-10 cm, kërkohet një tension prej 25 V për centimetër të gjatësisë së membranës dhe intensiteti i rrymës duhet të jetë 0,4-0,5 mA për centimetër të gjerësisë së membranës.Nëse këto vlera nuk arrihen ose tejkalohen gjatë elektroforezës, përqendrimi i tamponit duhet të rritet ose të hollohet.
Një përqendrim tepër i ulët i tamponit do të rezultojë në një lëvizje të shpejtë të brezave dhe një rritje në gjerësinë e brezit.Nga ana tjetër, një përqendrim tepër i lartë i buferit do të ngadalësojë migrimin e brezit, duke e bërë të vështirë dallimin e disa brezave të ndarjes.
Duhet të theksohet se në elektroforezën e membranës së acetatit të celulozës, një pjesë e konsiderueshme e rrymës përçohet përmes mostrës, e cila gjeneron një sasi të konsiderueshme nxehtësie.Ndonjëherë, përqendrimi i zgjedhur i tamponit mund të konsiderohet i përshtatshëm.Megjithatë, në kushtet e rritjes së temperaturës mjedisore ose kur përdoret tension më i lartë, avullimi i ujit për shkak të nxehtësisë mund të intensifikohet, duke rezultuar në një përqendrim tepër të lartë të tamponit dhe madje duke shkaktuar tharjen e membranës.
Vëllimi i mostrës
Në elektroforezën e membranës së acetatit të celulozës, sasia e vëllimit të mostrës përcaktohet nga faktorë të ndryshëm, duke përfshirë kushtet e elektroforezës, vetitë e vetë kampionit, metodat e ngjyrosjes dhe teknikat e zbulimit.Si parim i përgjithshëm, sa më e ndjeshme të jetë metoda e zbulimit, aq më i vogël mund të jetë vëllimi i mostrës, gjë që është e dobishme për ndarjen.Nëse vëllimi i kampionit është i tepërt, modelet e ndarjes elektroforetike mund të mos jenë të qarta dhe ngjyrosja gjithashtu mund të marrë kohë.Megjithatë, kur analizohen në mënyrë sasiore brezat e ndarë të ngjyrosur duke përdorur metodat e zbulimit kolorimetrik të elucionit, vëllimi i kampionit nuk duhet të jetë shumë i vogël, pasi mund të rezultojë në vlera më të ulëta të absorbimit për komponentë të caktuar, duke çuar në gabime më të larta në llogaritjen e përmbajtjes së tyre.Në raste të tilla, vëllimi i mostrës duhet të rritet siç duhet.
Në mënyrë tipike, vëllimi i mostrës i shtuar në çdo centimetër të linjës së aplikimit të kampionit varion nga 0,1 në 5 μL, ekuivalente me një sasi mostre prej 5 deri në 1000 μg.Për shembull, në analizën rutinë të elektroforezës së proteinave të serumit, vëllimi i mostrës i shtuar në çdo centimetër të linjës së aplikimit në përgjithësi nuk kalon 1 μL, ekuivalente me 60 deri në 80 μg proteinë.Megjithatë, kur analizohen lipoproteinat ose glikoproteinat duke përdorur të njëjtën metodë elektroforeze, vëllimi i mostrës duhet të rritet përkatësisht.
Si përfundim, vëllimi më i përshtatshëm i mostrës duhet të zgjidhet në bazë të kushteve specifike nëpërmjet një sërë eksperimentesh paraprake.
Përzgjedhja e tretësirës së ngjyrosjes
Shiritat e ndarë në elektroforezën e membranës së acetatit të celulozës zakonisht ngjyrosen përpara zbulimit.Komponentët e ndryshëm të mostrës kërkojnë metoda të ndryshme ngjyrosjeje dhe metodat e ngjyrosjes të përshtatshme për elektroforezën e membranës së acetatit të celulozës mund të mos jenë plotësisht të zbatueshme për letrën filtruese.
Ekzistojnë tre parime kryesore për të zgjedhur zgjidhjen e ngjyrosjesmembrana e acetatit të celulozës.Së pari,Ngjyrat e tretshme në ujë duhet të preferohen mbi ngjyrat e tretshme në alkool për të shmangur tkurrjen e membranës dhe deformimin e shkaktuar nga solucioni i ngjyrosjes së kësaj të fundit.Pas njollosjes, është e rëndësishme të shpëlani membranën me ujë dhe të minimizoni kohëzgjatjen e ngjyrosjes.Përndryshe, membrana mund të përkulet ose tkurret, gjë që do të ndikonte në zbulimin e mëvonshëm.
Së dyti, preferohet të zgjidhen ngjyra me afinitet të fortë ngjyrues për kampionin.Në elektroforezën e membranës së acetatit të celulozës së proteinave të serumit, amino black 10B përdoret zakonisht për shkak të afinitetit të tij të fortë ngjyrues për përbërës të ndryshëm të proteinave të serumit dhe qëndrueshmërisë së tij.
Së treti, duhet të zgjidhen ngjyra të cilësisë së besueshme.Disa ngjyra, pavarësisht se kanë të njëjtin emër, mund të përmbajnë papastërti që rezultojnë në një sfond veçanërisht të errët pas ngjyrosjes.Kjo madje mund të turbullojë brezat fillimisht të ndara mirë, duke i bërë ato të vështira për t'u dalluar.
Së fundi, zgjedhja e përqendrimit të solucionit të ngjyrosjes është e rëndësishme.Teorikisht, mund të duket se një përqendrim më i lartë i solucionit të ngjyrosjes do të çonte në ngjyrosje më të plotë të përbërësve të mostrës dhe rezultate më të mira të ngjyrosjes.Megjithatë, ky nuk është rasti.Afiniteti lidhës ndërmjet përbërësve të mostrës dhe ngjyrës ka një kufi të caktuar, i cili nuk rritet me rritjen e përqendrimit të tretësirës së ngjyrosjes.Përkundrazi, një përqendrim tepër i lartë i solucionit të ngjyrosjes jo vetëm që e shpërdoron ngjyrën, por edhe e bën të vështirë arritjen e një sfondi të qartë.Për më tepër, kur intensiteti i ngjyrës arrin një vlerë maksimale të caktuar, kurba e absorbimit të bojës nuk ndjek një marrëdhënie lineare, veçanërisht në matjet sasiore. Në elektroforezën e membranës së acetatit të celulozës, përqendrimi i tretësirës së ngjyrosjes është përgjithësisht më i ulët se ai i përdorur në elektroforezën e letrës.
Detaje për të ditur rreth Bioteknologjisë Pekin Liuyi's membrana e acetatit të celulozësrezervuari i elektroforezës dhe aplikimi i tij për elektroforezë, ju lutemi vizitoni këtu:
lEksperiment për ndarjen e proteinave të serumit me membranë celulozë acetate
lElektroforeza e membranës së acetatit të celulozës
Nëse keni ndonjë plan blerjeje për produktet tona, ju lutemi mos hezitoni të na kontaktoni.Mund të na dërgoni mesazh në email[email i mbrojtur]ose[email i mbrojtur], ose ju lutemi na telefononi në +86 15810650221 ose shtoni Whatsapp +86 15810650221, ose Wechat: 15810650221.
Referenca:Elektroforeza (botimi i dytë) nga z. Li
Koha e postimit: Qershor-06-2023